第281章 变异感染者DNA提取

生化危城 持械码字 1359 字 1个月前

血液干燥后,其中的DNA会逐渐降解,从而减少提取成功的可能性。一般而言,血液干燥后的DNA保存时间在几天到几周之间,不同的环境条件会产生不同的影响。

而且环境因素对血液中DNA的保存影响也很大,高温、湿度和紫外线等环境因素会加速DNA的降解,从而影响提取成功率。

好在这感染者的血液本就漆黑,干涸之后活性保留反而比人类的血液活性保留的时间更长。

钟教授将提取任务交给了其中一名研究员,研究员迅速的进行着准备工作。

准备工作如下:

1. 第一次使用时,在Buffer W2 concentrate 和Buffer W1B concentrate 中按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

2. Buffer W2(12x96 试剂盒)配制:在提供的500 ml 空瓶中加入15 ml 10xBuffer W2,135 ml 去离子水和350 ml 乙醇,可用100%无水乙醇或95%乙醇。

3. 根据瓶上标签将蛋白酶K 溶解于Buffer PK 中,请勿旋涡振荡。

4. 准备70℃温浴。

5. 使用前检查Buffer BL 是否有沉淀析出,若出现沉淀,请于70℃温浴加热至沉淀完全溶解后再使用。

完成试剂准备工作之后,在钟教授的首肯之下,研究员开始进行DNA的提取。

具体操作步骤如下:

1. 向96 圆孔板的每孔中加入20 ul 蛋白酶K。

2. 加200 ul 抗凝全血到96 圆孔板中。

~undefined 若全血样品体积少于200 ul,用PBS 补充到200 ul。

~undefined 若样品为鸟类血,样品用量须低于10 ul。

~undefined 若需得到RNA-free 的基因组DNA,在步骤3 加入Buffer BL 前加入DNase-free 的RNase A(20 mg/ ml) 。